Pregătirea eșantionului:
Colectarea probelor: colectați probe precum sânge, țesut, salivă și urină în funcție de scopul experimentului.
Extracția ADN -ului: utilizați un kit dedicat de extracție ADN pentru a extrage ADN -ul din eșantion.
Pregătirea reacției PCR:
Primeri de proiectare: Proiectare perechi de grund specifici bazate pe secvența țintă pentru amplificarea ADN -ului șablonului.
Pregătiți amestecul de reacție: incluzând ADN -ul șablonului, primerii, tampon, ADN polimerază, DNTPS (deoxinucleozid trifosfați), mg 2+, etc.
Setați programul PCR:
Setări instrument PCR: Introduceți parametrii ciclului PCR presetat, cum ar fi temperatura de preîncălzire de 95 de grade, temperatura de denaturare (cum ar fi 95 de grade), temperatura de recoacere (cum ar fi 55 de grade), temperatura de extindere (cum ar fi 72 grade) și numărul de cicluri.
Reacție PCR:
Adăugați probă: adăugați amestecul de reacție la rezervorul de reacție PCR sau cip și fiecare probă are de obicei o reacție bine.
Efectuați PCR: Ciclurile instrumentului PCR în funcție de programul presetat, inclusiv pași de încălzire, răcire, recoacere și extensie.
Analiza produsului:
Răcire după amplificare: După finalizarea PCR, eșantionul este răcit pe scurt la 4 grade.
Separarea electroforetică: utilizați tehnologia electroforezei cu gel, cum ar fi electroforeza cu gel de agaroză, pentru a separa produsele PCR de diferite lungimi.
Scanarea fluorescenței: primerii etichetați fluorescent emit lumina unei lungimi de undă specifice în produsul amplificat, iar instrumentul PCR citește aceste semnale și le înregistrează.
Prelucrarea și interpretarea datelor:
Software de analiză a datelor: Utilizați un software specializat pentru a analiza semnalul fluorescent și calcularea concentrației sau concentrației relative a fragmentului țintă.
Interpretarea rezultatelor: pe baza curbei PCR și a valorii de bază, determinați dacă PCR are succes, dacă fragmentul țintă există și cât de mult este.
Înregistrarea și conservarea rezultatelor:
Înregistrați rezultatele în raportul experimental și păstrați în mod corespunzător datele și eșantioanele originale.